关于CTC基础理论

1.CTC的半衰期
循环肿瘤细胞的半衰期是多少,循环肿瘤细胞能够在血液循环系统中存活多久?
答:可能不同的肿瘤CTC半衰期不同,有的文献介绍乳腺癌CTC半衰期是1-2.4H。肺癌这方面的研究暂无文献报告
2.早期CTC的产生
早期(原位癌)的患者肿瘤细胞怎么入血?
答:研究表明,早期肿瘤的单个CTC或CTM由于某些因素影响(EMT或炎症因素)穿过血管壁进入外周血,这些逃逸的CTC细胞绝大多数在血中凋亡了,只有少数CTC粘附在血管壁,重新穿过血管壁,寻找新的器官生长,形成转移灶。
3.CTC叶酸受体的特异性
抗原、抗体怎么区别正常细胞与癌细胞叶酸受体,正常人体是否有叶酸受体?
答:我们产品能检测CTC,不是通过区分癌细胞和正常细胞的叶酸受体来实现的,我的原理是在外周血中只有CTC细胞表面高度表达FR(除少数激活的单核细胞也表达FR,但是我们负向富集时去除了这类细胞),正常组织虽然低表达FR,但是正常组织细胞不会进入到外周血中,所以对于血液标本,FR的浓度直接反应的就是CTC的浓度
4.区分CTC干细胞
CTC联合怎样的技术可以区分CTC的活性大小,哪些是CTC干细胞,哪些不是?
答:CTC的转移性和侵袭性(如果是你指的活性的话),除了和CTC自身的因素相关外还和很多因素相关,例如患者自身的免疫状态,CTC外的其他细胞及其构成的多细胞形态相关等,所以没有明确的技术可以区分哪些CTC更具转移性和侵袭性。竞品公司曾提出CTC或CTM(循环肿瘤微栓子)体积越大越具有侵袭性,但是越来越多的研究表明,CTC的大小与肿瘤类型,分期和患者状态等多种因素相关,有时小的CTC也有很强的侵袭性。
5.ctDNA比较
跟游离DNA相比,有什么好处?
答:循环血中的游离DNA包括,肿瘤组织释放的ctDNA和正常组织的cfDNA,目前临床主要通过检测游离DNA中的ctDNA来指导临床靶向药物使用,但是游离DNA背景很杂且成分变化很快,故很难通过只检测ctDNA来直接反应肿瘤的负荷变化。
而不同于游离DNA,ctc是肿瘤组织释放入血的细胞,直接反应的是肿瘤的负荷及其变换,可用于肿瘤的辅助诊断、疗效评估和复发监测。同时,CTC是有活性的细胞,它可以反映DNA后的转录和翻译水平,例如CTC表明的叶酸受体FR的表达情况,我们的研究表明,FR的表达丰度与培美曲塞的疗效正相关。

关于CytoploRare®产品

1.产品验证细胞验证
怎么证明检测到的细胞就是肿瘤细胞? 只有病理看到的才是最准确的,对于仪器检测的准确性抱有疑惑
答:首先从原理上来说,外周血中只有CTC表达FR,我们是利用FR作为检测靶点来检测CTC的,故检测到的就是CTC细胞。其次,我们在PLOS ONE杂志发表了“Quantification of Rare Circulating Tumor Cells in Non-Small Cell Lung Cancer by Ligand-Targeted PCR”,该论文设计了利用经典的细胞免疫荧光法做了CTC和对应靶标验证(注:CK靶标被认为是肺癌特异的靶标,FR是我们技术的检测靶标,DAPI染色证明是完整细胞)。最后,传统的病理检测前也要进行CTC的富集和荧光染色,富集存在部分CTC丢失问题,染色存在非特异结合问题,均会对病理检测结果带来影响。故不能简单
的认为只有看到的才是准确的。
2.产品验证富集纯度
如何确定我们负向富集的来的东西是比较纯的CTC,活的还是凋零的?还有没有其他干扰没有被彻底去除,有的话是什么,比例是多少?后期如何降低误差?
答:根据我们的产品性能验证数据表明,我们负向富集得到的是具有活性的CTC,富集纯度是99%,还会有1%的白细胞残余,但是因为我们是以CTC特有的叶酸受体作为靶点,白细胞表面不表达FR,所以不影响后续的FR靶向PCR的检测。需要注意的是,我们对于待测患者的白细胞水平需密切关注,当患者白细胞水平高于1.2×107/mL,就会发生白细胞的干扰,出现测值升高的结果,需要排除。
3.产品性能 灵敏度 假阳性
灵敏度太高会不会带来假阴性或假阳性?
答:任何指标的灵敏度和特异性都是对矛盾体,灵敏度高了势必导致特异性降低,产生假阳性的结果,我们产品对于肺癌(含Ⅰ-Ⅳ期)组和非肺癌组(肺部良性疾病和健康组)灵敏度为80%,特异性为88%。

关于CTC临床使用

1.肺癌晚期CTC阴性
为什么晚期全身性转移的肿瘤病人检测不出CTC?
答:因为我们产品使用FR作为CTC检测靶点的,并且72%-83%的肺癌患者肿瘤细胞表面高表达,仍然存在20%左右低表达甚至不表达,故存在如题所述的假阴性结果。
2.选择治疗方法化疗/放疗
循环肿瘤细胞检测得到和检测不到能不能指导放化疗选择?
答:目前不能仅凭CTC的检测结果来选择放疗或化疗的治疗方式,需要结合其他临床检测(如影像学检测)、病理学检测及临床症状做综合诊断,根据诊断结果来选择治疗方式。
3.采血时间重复性
如果连续几天分次检测甚至同一天内多次检测同一患者样本,检测到的CTC数目有没有明显差异?血液的CTC相对均匀,但不同阶段采血也可能有误差,怎样消除这个误差?
答: 由于CTC在外周血中的含量稀少,每毫升血中存在1-10个CTC左右,并且是连续产生的,在血液中呈动态分布,会出现滞后现象,具有很强的异质性。因此同一人多次检测会出现结果有差异。但是对于临床使用来说,我们更关注的是CTC的浓度变化趋势,即在疾病的治疗过程中,多次采样检测,观察这些采样点间的CTC浓度变化趋势(是否超过阈值,甚至倍增)来指导临床。
4.适应症肺癌种类
咱们的CTC检测是不是适用所有的肺癌种类?
答:基于我们的大临床数据,我们CTC对于所有肺癌病理亚型的检测阳性率均在80%左右(具体数据可参见临床大报告),可满足所有肺癌种类的检测。
5.治疗方案CT比较
CTC检测是否可以替代CT?
答:我们CTC检测是CT的黄金搭档,少了谁都不是最佳的。CT检测主要发现肿块、肿块大小和部位,但是CT没法准确判断肿块的良恶性,无法判断肿块是否是肿瘤;CTC检测主要用于鉴别肿块的良恶性,甚至在CT未发现肿块前就预判患癌风险,提示密切临床观察及病理确诊。故在肺癌的早期筛查或中后期治疗时,CT和CTC同样重要。一般患者在ct中显示疑似肿瘤人群,要同时查很多肿瘤标志物来辅助诊断,而CTC就是其中最好的辅助诊断依据。
6.药物影响培美曲塞
使用培美曲塞会影响体内叶酸水平,是否影响结果?
答:因为我们检测靶点是CTC表面的叶酸受体,故服用叶酸通道相关药物会改变FR的表达,改变CTC的判读阈值,故我们推荐根据CTC测值浓度变化来判断药物疗效,抵消由于FR表达变化带来的CTC阈值变化。并且,我们的临床结果表明,我们CTC的测值与培美曲塞的疗效成正相关性,即CTC测值越高,培美曲塞的疗效越好,故可根据CTC的测值筛选出最适合使用培美曲塞的患者。